Plásmido Doble Nickase (h) ENT2: sc-401952-NIC

SLC29A2 codifica el transportador equilibrativo de nucleósidos 2 (ENT2), un transportador de membrana plasmática de amplia expresión que media un flujo bidireccional y dependiente de la concentración de nucleósidos de purinas y pirimidinas. ENT2 sostiene las vías de rescate de nucleósidos que mantienen los reservorios de nucleótidos para la síntesis de ADN/ARN y contribuye a las respuestas celulares al estrés metabólico al regular la disponibilidad de nucleósidos extracelulares e intracelulares. Al modular la homeostasis de los nucleósidos, ENT2 se vincula con procesos como la progresión del ciclo celular, las respuestas al estrés de replicación y la señalización dependiente de nucleósidos en numerosos tejidos. La actividad y la expresión alteradas de SLC29A2/ENT2 se han investigado en contextos que incluyen la biología tumoral, la función de células inmunitarias y la variación relacionada con transportadores en la sensibilidad celular a análogos de nucleósidos, lo que respalda su relevancia para estudios mecanísticos.

ENT2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SLC29A2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SLC29A2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SLC29A2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SLC29A2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.