ENDOG Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420176

Descripción general

Endog codifica la endonucleasa G (ENDOG), una nucleasa mitocondrial implicada en el metabolismo del ADN mitocondrial y en la degradación controlada de ácidos nucleicos durante el estrés celular. ENDOG participa en vías vinculadas a la fragmentación del ADN de tipo apoptótico, al mantenimiento del genoma mitocondrial y a una homeostasis mitocondrial más amplia que puede influir en la fosforilación oxidativa y en la señalización de especies reactivas de oxígeno. La actividad alterada de ENDOG se ha asociado con una disfunción mitocondrial y una integridad genómica desreguladas, procesos relevantes en modelos de neurodegeneración, disfunción cardiometabólica y estrés inflamatorio. En sistemas murinos, Endog proporciona un punto de intervención manejable para investigar la comunicación de la mitocondria al núcleo y las decisiones de destino celular sensibles al estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ENDOG (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Endog en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Endog junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Endog tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ENDOG.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Endog para la investigación de la señalización de ENDOG, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Endog críticos para la función de ENDOG
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Endog para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ENDOG CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido ENDOG CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Endog. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ENDOG (m) y el plásmido HDR ENDOG (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Endog para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Endog definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.