ENDOG Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420176

Panoramica

Endog codifica l’endonucleasi G (ENDOG), una nucleasi mitocondriale implicata nel metabolismo del DNA mitocondriale e nella degradazione controllata degli acidi nucleici durante lo stress cellulare. ENDOG partecipa a vie associate alla frammentazione del DNA di tipo apoptotico, al mantenimento del genoma mitocondriale e a una più ampia omeostasi mitocondriale che può influenzare la fosforilazione ossidativa e la segnalazione mediata dalle specie reattive dell’ossigeno (ROS). Un’attività alterata di ENDOG è stata associata a una disfunzione della funzione mitocondriale e dell’integrità del genoma, processi rilevanti in modelli di neurodegenerazione, disfunzione cardiometabolica e stress infiammatorio. Nei sistemi murini, Endog rappresenta un nodo sperimentalmente gestibile per indagare la comunicazione mitocondrio-nucleo e le decisioni sul destino cellulare in risposta allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ENDOG (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Endog in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Endog insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Endog a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ENDOG.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Endog per lo studio della segnalazione di ENDOG, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Endog critici per la funzione di ENDOG
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Endog per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ENDOG CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ENDOG CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Endog. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ENDOG Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ENDOG (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Endog per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Endog definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.