Plasmide CRISPR d'Activation (h) Endo180: sc-403483-ACT

MRC2 code Endo180 (uPARAP), un récepteur endocytaire transmembranaire de la famille des récepteurs du mannose, qui se lie aux collagènes et à d’autres ligands de la matrice extracellulaire et les internalise en vue de leur dégradation lysosomale. L’activité d’Endo180 soutient le renouvellement de la matrice extracellulaire, l’adhésion et la migration cellulaires, ainsi que le remodelage du microenvironnement tumoral, via des voies de capture et de trafic du collagène couplées au traitement endosomal–lysosomal. Ce récepteur est fréquemment étudié dans les fibroblastes, les cellules de la lignée macrophagique et des modèles de carcinomes invasifs, où la dynamique du collagène façonne l’architecture tissulaire et la signalisation. Une expression dysrégulée de MRC2/Endo180 est associée au remodelage fibrotique et à la biologie de l’invasion cancéreuse, ce qui en fait une cible pertinente pour les études mécanistiques des comportements cellulaires pilotés par la matrice.

Endo180 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MRC2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Endo180 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MRC2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MRC2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Endo180. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MRC2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Endo180 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Endo180 dans les cellules tumorales présentant une expression de MRC2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.