ENC1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420175

Übersicht

ENC1 (ectodermal-neural cortex 1) kodiert ein Kelch-Repeat-enthaltendes Protein, das als aktinassoziierter Adapter fungiert und an der Organisation des Zytoskeletts sowie an Programmen der zellulären Differenzierung beteiligt ist. In Mausgeweben ist die ENC1-Expression besonders in neuronalen und anderen differenzierenden Zelllinien angereichert; dort wurde sie mit der Modulation von oxidativen Stressantworten und der Proteinhomöostase in Verbindung gebracht. Beschriebene Interaktionen und Signalwegassoziationen verorten ENC1 in Prozessen, die Veränderungen der Zellform, Neuritenauswuchs und den regulierten Abbau zytoskelettassoziierter Proteine steuern, einschließlich einer Crosstalk mit ubiquitinabhängigen Mechanismen. Eine dysregulierte ENC1-Expression wurde im Kontext neuroentwicklungsbedingter Veränderungen und der Tumorbiologie beobachtet, was ihre Nutzung als molekularen Ansatzpunkt zur Untersuchung des Differenzierungszustands und stressadaptiver Signalübertragung unterstützt.

Das ENC1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Enc1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Enc1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Enc1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ENC1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Enc1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ENC1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Enc1-Exone abzielen, die für die ENC1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Enc1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ENC1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ENC1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Enc1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ENC1 HDR-Plasmid (m) und ENC1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Enc1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Enc1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.