Plasmide CRISPR/Cas9 KO Enamelin (m): sc-420174

Présentation

Enam code l’émailine (enamelin), une glycoprotéine sécrétée de la matrice extracellulaire indispensable à la formation de l’émail dentaire chez la souris. L’émailine participe à la biomineralisation de l’émail en régulant la nucléation et la croissance des cristaux d’hydroxyapatite, et en coordonnant l’assemblage ainsi que le traitement de la matrice de l’émail en concertation avec d’autres protéines de l’amélogenèse. Son activité soutient la déposition de matrice par les améloblastes, le remodelage protéolytique et les processus de maturation minérale qui déterminent l’épaisseur de l’émail et son intégrité structurelle. L’altération de la fonction d’ENAM est associée à une hypoplasie de l’émail et à des phénotypes de type amélogenèse imparfaite, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude du développement des tissus minéralisés et des mécanismes de pathologie dentaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Enamelin (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Enam dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Enam, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Enam à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Enamelin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Enam pour l'étude de la signalisation de Enamelin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Enam essentiels à la fonction de Enamelin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Enam pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Enamelin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Enamelin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Enam. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Enamelin plasmide HDR (m) et le Enamelin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Enam pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Enam définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.