Plasmide CRISPR/Cas9 KO EMILIN-2 (h): sc-406521

Présentation

EMILIN2 code pour l’EMILIN‑2, une glycoprotéine de la matrice extracellulaire enrichie dans les microfibrilles associées aux fibres élastiques, qui contribue à l’organisation de la matrice et à la signalisation cellule–matrice. EMILIN‑2 interagit avec l’adhésion médiée par les intégrines et la mécanotransduction, influençant la dynamique du cytosquelette, la migration et le remodelage tissulaire. Par ces signaux extracellulaires, EMILIN2 peut moduler des voies liées à l’inflammation ainsi qu’à l’homéostasie vasculaire et stromale, notamment des processus qui façonnent les réponses angiogéniques et fibrosantes. Une expression dérégulée d’EMILIN2 et une architecture matricielle altérée ont été associées au remodelage du microenvironnement tumoral et à des anomalies de la matrice extracellulaire liées au système cardiovasculaire, ce qui étaye sa pertinence pour la recherche sur les mécanismes des maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO EMILIN-2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène EMILIN2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du EMILIN2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert EMILIN2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine EMILIN-2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en EMILIN2 pour l'étude de la signalisation de EMILIN-2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de EMILIN2 essentiels à la fonction de EMILIN-2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de EMILIN2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le EMILIN-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le EMILIN-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus EMILIN2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le EMILIN-2 plasmide HDR (h) et le EMILIN-2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie EMILIN2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles EMILIN2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.