Elongin A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404668

Panoramica

ELOA codifica per Elongin A, un componente centrale del complesso di elongazione della trascrizione Elongin, che aumenta la processività della RNA polimerasi II e contribuisce a coordinare una sintesi di mRNA efficiente. Elongin A partecipa anche ad assemblaggi di ligasi dell’ubiquitina accoppiati alla trascrizione, collegando il controllo dell’elongazione al turnover proteico e alle risposte allo stress cellulare. Attraverso questi ruoli, ELOA influenza programmi di espressione genica che regolano la proliferazione, le risposte al danno al DNA e l’adattamento a condizioni proteotossiche. La disregolazione dell’elongazione della trascrizione e della regolazione mediata dall’ubiquitina è una caratteristica ricorrente nei fenotipi oncologici e neuroevolutivi, rendendo ELOA un nodo utile per studi meccanicistici di questi pathway.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Elongin A (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ELOA in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ELOA insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ELOA a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Elongin A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ELOA per lo studio della segnalazione di Elongin A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ELOA critici per la funzione di Elongin A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ELOA per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Elongin A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Elongin A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ELOA. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Elongin A Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Elongin A (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ELOA per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ELOA definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.