eIF4B Lentiviral Activation Particles (h): sc-402494-LAC

EIF4B kodiert den humanen Translationsinitiationsfaktor eIF4B, einen Regulator der cap-abhängigen mRNA-Translation, der die Rekrutierung des 43S-Präinitiationskomplexes fördert und die RNA-Helikase-Aktivität innerhalb der eIF4F-Achse verstärkt, wodurch das Scanning durch strukturierte 5′-UTRs erleichtert wird. Über die Modulation der Translationseffizienz integriert eIF4B Signale aus Wachstums- und Stresswegen, darunter PI3K–AKT–mTOR und MAPK, und prägt so die Proteomzusammensetzung während Proliferation und zellulärer Anpassung. Eine dysregulierte eIF4B-Aktivität wurde mit veränderten Programmen der Translationskontrolle in Verbindung gebracht, die an onkogenen Signalwegen und Überlebensphänotypen beteiligt sind, und eIF4B wird häufig als Knotenpunkt untersucht, der upstream-Kinase-Netzwerke mit selektiver mRNA-Translation verknüpft. Diese Eigenschaften machen EIF4B zu einem nützlichen Ziel, um Translationsregulation, die Kopplung von Signalwegen an Translation sowie pfadabhängige Proteostase in humanen Zellen zu analysieren.

eIF4B Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente EIF4B-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

eIF4B Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der EIF4B-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen eIF4B-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen EIF4B-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.