eIF3γ CRISPR Activation Plasmid (h): sc-418339-ACT

EIF3H kodiert die Untereinheit Gamma des eukaryotischen Translationsinitiationsfaktors 3 (eIF3γ), einen Kernbestandteil des eIF3‑Komplexes, der während der cap‑abhängigen Initiation der Translation die Rekrutierung der 40S‑ribosomalen Untereinheit, das Laden der mRNA und die Erkennung des Startcodons koordiniert. Durch die Regulation der globalen sowie transkriptselektiven Proteinsynthese beeinflusst eIF3γ Zellwachstum, Stressantworten und Proteostase und greift dabei in Signalwege wie die mTOR‑Signalgebung und Programme der integrierten Stressantwort ein, die die Translationsleistung feinabstimmen. Eine veränderte Funktion des eIF3‑Komplexes wird mit einer dysregulierten Translationskontrolle in proliferativen und stressadaptiven zellulären Zuständen in Verbindung gebracht, was die Untersuchung von EIF3H in krankheitsrelevanten Modellen unterstützt, in denen translationales Reprogramming zum Phänotyp beiträgt.

eIF3γ Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen EIF3H-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

eIF3γ Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des EIF3H-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der EIF3H-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen eIF3γ-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native EIF3H-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von eIF3γ-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des eIF3γ-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem EIF3H-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.