Plasmide CRISPR d'Activation (h) eIF2C4: sc-401658-ACT

AGO4, également connu sous le nom d’eIF2C4, code l’Argonaute‑4, un membre de la famille des protéines Argonaute qui se lie à de petits ARN afin d’orienter une régulation spécifique de la séquence de l’expression génique. Par l’intermédiaire de processus associés au complexe de silençage induit par l’ARN (RISC), AGO4 contribue à des mécanismes de contrôle post‑transcriptionnel qui modulent la stabilité des ARNm et leur traduction dans le cytoplasme. La régulation de l’ARN dépendante des Argonaute influence des voies impliquées dans l’identité cellulaire, la différenciation et les réponses au stress, et les réseaux de petits ARN altérés sont fréquemment étudiés dans le contexte de la signalisation oncogénique et de la régulation immunitaire. Dans des cadres de recherche, une dérégulation du contrôle génique médié par les Argonaute a été associée à un remodelage anormal du transcriptome observé dans de multiples phénotypes cellulaires pertinents pour les maladies.

eIF2C4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de AGO4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

eIF2C4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus AGO4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription AGO4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de eIF2C4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus AGO4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de eIF2C4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie eIF2C4 dans les cellules tumorales présentant une expression de AGO4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.