eIF2Bδ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420143

Übersicht

Eif2b4 kodiert die δ‑Untereinheit von eIF2B, dem Guanin-Nukleotid-Austauschfaktor, der eIF2‑GDP wieder zu eIF2‑GTP „auflädt“ und damit die Translationsinitiation steuert. Durch die Modulation der Verfügbarkeit des ternären Komplexes integriert eIF2B Nährstoff- und Stresssignale innerhalb der integrierten Stressantwort und überschneidet sich mit der von der eIF2α‑Phosphorylierung abhängigen Regulation der Proteinsynthese. Die eIF2B‑Aktivität beeinflusst die Proteostase, das Zellwachstum und adaptive Transkriptionsprogramme, die mit ER‑Stress und oxidativem Stress verknüpft sind. Funktionsstörungen in eIF2B‑Untereinheiten sind mit Signalwegen der hypomyelinisierenden Leukodystrophie assoziiert, wodurch Eif2b4 einen relevanten Knotenpunkt für die Untersuchung stresssensitiver Translationskontrolle in neuronalen und glialen Systemen darstellt.

Das eIF2Bδ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Eif2b4-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Eif2b4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Eif2b4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die eIF2Bδ-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Eif2b4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der eIF2Bδ-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Eif2b4-Exone abzielen, die für die eIF2Bδ-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Eif2b4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom eIF2Bδ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom eIF2Bδ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Eif2b4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das eIF2Bδ HDR-Plasmid (m) und eIF2Bδ HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Eif2b4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Eif2b4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.