Plasmide CRISPR/Cas9 KO eIF2α (h): sc-400199

Présentation

EIF2S1 code la sous-unité alpha du facteur eucaryote d’initiation de la traduction 2 (eIF2α), un régulateur central de l’initiation de la traduction dépendante de la coiffe et de la protéostasie. La phosphorylation d’eIF2α sur la sérine 51 intègre l’action de plusieurs kinases de détection du stress (PERK/EIF2AK3, GCN2/EIF2AK4, PKR/EIF2AK2 et HRI/EIF2AK1) afin de moduler la disponibilité du complexe ternaire, de réprimer la synthèse protéique globale et de favoriser des programmes de traduction sélectifs, tels qu’ATF4, au sein de la réponse intégrée au stress. Par cette voie, eIF2α relie le stress du réticulum endoplasmique, la carence en acides aminés, la détection des virus et le stress oxydant à un remodelage adaptatif transcriptionnel et traductionnel. Une signalisation d’eIF2α dérégulée est impliquée dans la tolérance des cellules cancéreuses au stress, des phénotypes d’agrégation protéique dans les maladies neurodégénératives, ainsi que des états métaboliques et inflammatoires via une régulation altérée de la traduction et la dynamique des granules de stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO eIF2α (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène EIF2S1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du EIF2S1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert EIF2S1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine eIF2α.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en EIF2S1 pour l'étude de la signalisation de eIF2α, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de EIF2S1 essentiels à la fonction de eIF2α
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de EIF2S1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le eIF2α plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le eIF2α plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus EIF2S1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le eIF2α plasmide HDR (h) et le eIF2α (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie EIF2S1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles EIF2S1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.