Plasmide CRISPR d'Activation (h) eHAND: sc-403311-ACT

HAND1 code le facteur de transcription eHAND de la famille basic helix–loop–helix (bHLH), un régulateur majeur du patronnage du mésoderme et du développement cardiovasculaire. eHAND coordonne des programmes d’expression génique qui contrôlent l’engagement de lignée, la migration cellulaire et des réseaux transcriptionnels gouvernés par des morphogènes, notamment via des interactions avec des éléments régulateurs contenant des E-box et par des interactions fonctionnelles avec des voies de signalisation du développement. En biologie humaine, une activité altérée de HAND1 a été associée à des malformations congénitales du cœur ainsi qu’à des anomalies du placenta et des trophoblastes, ce qui en fait un nœud pertinent pour l’étude de la cardiogenèse et des circuits précoces de régulation génique embryonnaire.

eHAND Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HAND1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

eHAND Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HAND1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HAND1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de eHAND. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HAND1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de eHAND au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie eHAND dans les cellules tumorales présentant une expression de HAND1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.