Plásmido CRISPR de Activación (h) EG-VEGF: sc-404774-ACT

PROK1 codifica el VEGF derivado de glándulas endocrinas (EG-VEGF), una citocina proangiogénica secretada que señaliza principalmente a través de los receptores acoplados a proteína G PROKR1 y PROKR2 para regular la migración de células endoteliales, la permeabilidad y la remodelación vascular. EG-VEGF muestra una actividad selectiva por tejidos y contribuye a la especialización vascular endocrina y reproductiva, conectando señales extracelulares con programas de señalización posteriores dependientes de MAPK/ERK, PI3K/AKT y calcio. En biología humana, la desregulación de la señalización de PROK1 se ha asociado con angiogénesis aberrante y cambios en el microambiente inflamatorio, lo que la convierte en un punto útil para estudiar la regulación del nicho vascular. Esta vía se examina con frecuencia en contextos en los que la comunicación endotelio–estroma y los programas transcripcionales sensibles al oxígeno o a citocinas influyen en la remodelación tisular.

EG-VEGF El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PROK1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

EG-VEGF El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PROK1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PROK1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de EG-VEGF. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PROK1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de EG-VEGF en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía EG-VEGF en células tumorales con expresión de PROK1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.