Plásmido CRISPR de Activación (h) EBF3: sc-402181-ACT

EBF3 (factor temprano de células B 3) es un factor de transcripción de tipo hélice-bucle-hélice que se une al ADN para regular programas de expresión génica que controlan la diferenciación y la maduración neuronal, así como patrones más amplios del desarrollo. En células humanas, EBF3 contribuye a redes transcripcionales que especifican linajes y coopera con complejos de cromatina y ensamblajes de cofactores para moldear transiciones de estado celular y la regulación génica específica de tejidos. La expresión o función desregulada de EBF3 se ha vinculado con fenotipos del neurodesarrollo y con circuitos transcripcionales alterados observados en diversos contextos de enfermedad, lo que lo convierte en un nodo útil para investigar redes reguladoras génicas del desarrollo. El estudio de las vías dependientes de EBF3 puede aclarar cómo el momento de la transcripción y la selección de promotores/enhancers influyen en las decisiones de destino celular y en la transcripción sensible al estrés.

EBF3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de EBF3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

EBF3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus EBF3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional EBF3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de EBF3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo EBF3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de EBF3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía EBF3 en células tumorales con expresión de EBF3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.