EAAT1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400917

Descripción general

SLC1A3 codifica el transportador de aminoácidos excitadores 1 (EAAT1), un transportador de glutamato/aspartato de alta afinidad y dependiente de sodio, enriquecido en astrocitos, que favorece la eliminación del glutamato extracelular. Al acoplar la captación de glutamato a los gradientes iónicos, EAAT1 ayuda a mantener la transmisión sináptica, regula el acoplamiento metabólico neurona–glía y limita la señalización excitotóxica, a la vez que contribuye al equilibrio redox al aportar glutamato para la síntesis de glutatión. La actividad de EAAT1 se integra con la neurotransmisión glutamatérgica, los programas homeostáticos astrocitarios y las vías que controlan el amortiguamiento de iones extracelulares y el reciclaje de neurotransmisores. La alteración de la función o la expresión de SLC1A3 se ha vinculado a fenotipos del neurodesarrollo y neurodegenerativos, incluida la ataxia episódica y la susceptibilidad al daño excitotóxico, lo que lo hace relevante para estudios sobre la estabilidad de circuitos del SNC y la biología glial.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO EAAT1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SLC1A3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SLC1A3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SLC1A3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína EAAT1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SLC1A3 para la investigación de la señalización de EAAT1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SLC1A3 críticos para la función de EAAT1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SLC1A3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido EAAT1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido EAAT1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SLC1A3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR EAAT1 (h) y el plásmido HDR EAAT1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SLC1A3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SLC1A3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.