Plasmide CRISPR/Cas9 KO EAAT1 (h): sc-400917

Présentation

SLC1A3 code le transporteur 1 des acides aminés excitateurs (EAAT1), un transporteur du glutamate/de l’aspartate à haute affinité, dépendant du sodium, enrichi dans les astrocytes et qui favorise l’élimination du glutamate extracellulaire. En couplant la capture du glutamate aux gradients ioniques, EAAT1 contribue au maintien de la transmission synaptique, régule le couplage métabolique neurone–glie et limite la signalisation excitotoxique, tout en participant à l’équilibre redox grâce à la disponibilité du glutamate pour la synthèse du glutathion. L’activité d’EAAT1 s’intègre à la neurotransmission glutamatergique, aux programmes homéostatiques astrocytaires et aux voies qui contrôlent le tamponnement des ions extracellulaires ainsi que le recyclage des neurotransmetteurs. Des altérations de la fonction ou de l’expression de SLC1A3 ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs, notamment l’ataxie épisodique et une susceptibilité aux lésions excitotoxiques, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la stabilité des circuits du SNC et de la biologie gliale.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO EAAT1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SLC1A3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SLC1A3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SLC1A3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine EAAT1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SLC1A3 pour l'étude de la signalisation de EAAT1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SLC1A3 essentiels à la fonction de EAAT1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SLC1A3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le EAAT1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le EAAT1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SLC1A3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le EAAT1 plasmide HDR (h) et le EAAT1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SLC1A3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SLC1A3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.