Plasmide CRISPR/Cas9 KO E4BP4 (h): sc-401353

Présentation

NFIL3 code pour le facteur de transcription à motif basique leucine zipper E4BP4, un régulateur contextuel de l’expression génique qui intègre les signaux circadiens aux programmes immunitaires et métaboliques. E4BP4 influence la différenciation et les fonctions effectrices au sein des lignées lymphoïdes, notamment via la régulation des réseaux de cytokines et des voies de survie, et contribue au contrôle homéostatique de la signalisation inflammatoire. Il interagit également avec des circuits transcriptionnels qui façonnent les réponses cellulaires au stress et la programmation temporelle du développement, reliant la régulation rythmique à des réseaux plus larges de contrôle de l’expression génique. Une activité dérégulée de NFIL3/E4BP4 a été associée, dans des contextes de recherche, à des pathologies à médiation immunitaire, à des phénotypes hématologiques, ainsi qu’à des altérations des phénotypes métaboliques et circadiens.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO E4BP4 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NFIL3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NFIL3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NFIL3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine E4BP4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NFIL3 pour l'étude de la signalisation de E4BP4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de NFIL3 essentiels à la fonction de E4BP4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NFIL3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le E4BP4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le E4BP4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NFIL3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le E4BP4 plasmide HDR (h) et le E4BP4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NFIL3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NFIL3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.