Plásmido Doble Nickase (h) Dynein IC1, cytosolic: sc-405213-NIC

DYNC1I1 codifica la cadena intermedia 1 de la dineína 1 citosólica, una subunidad central del complejo motor dineína–dinactina que impulsa el transporte dirigido hacia el extremo menos a lo largo de los microtúbulos. La dineína IC1 contribuye al reconocimiento de la carga y a la regulación del motor, apoyando el posicionamiento de endosomas y lisosomas, la organización del aparato de Golgi, la dinámica del huso mitótico y el transporte axonal retrógrado en neuronas. A través de estos procesos, DYNC1I1 ayuda a coordinar el tráfico intracelular, la división celular y la señalización espacial desde los orgánulos. La desregulación de los componentes del complejo de dineína se estudia con frecuencia en el contexto de mecanismos del neurodesarrollo y la neurodegeneración, así como de la inestabilidad cromosómica y de alteraciones en las vías de proteostasis.

Dynein IC1, cytosolic El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DYNC1I1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DYNC1I1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DYNC1I1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DYNC1I1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.