Plasmide Double Nickase (m) Dvl-3/Dishevelled 3/DVL3: sc-420082-NIC

Le gène murin Dvl3 code Dishevelled 3 (Dvl-3), une phosphoprotéine cytoplasmique qui agit comme un échafaudage central dans la signalisation Wnt. Dvl-3 transmet les signaux des récepteurs Frizzled vers des effecteurs en aval, aussi bien dans la transcription canonique dépendante de la β-caténine que dans les voies non canoniques de polarité planaire (PCP) et Wnt/Ca²⁺, influençant la polarité cellulaire, la migration et le remodelage du cytosquelette. Par l’intermédiaire de ces réseaux, DVL3 contribue à la mise en place des patrons embryonnaires et à l’homéostasie tissulaire, et une signalisation Wnt–Dishevelled dérégulée est fréquemment impliquée dans des processus oncogéniques, des défauts du développement et un remodelage associé à la fibrose. La perturbation de Dvl3 est donc largement utilisée pour étudier les interactions entre voies, notamment avec GSK3β/β-caténine, la signalisation JNK et la dynamique de l’actine médiée par les petites GTPases.

Dvl-3/Dishevelled 3/DVL3 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Dvl3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Dvl3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Dvl3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Dvl3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.