Plasmide CRISPR d'Activation (h) Dvl-3/Dishevelled 3/DVL3: sc-401041-ACT

DVL3 code pour Dishevelled 3 (Dvl-3), une protéine d’échafaudage cytoplasmique qui relaie les signaux des ligands Wnt vers des effecteurs en aval afin de coordonner la polarité cellulaire, la migration et la détermination du destin cellulaire. Grâce à ses interactions avec les récepteurs Frizzled et les composants centraux de la voie Wnt, Dvl-3 contribue à l’équilibre entre la transcription canonique dépendante de la β-caténine et les sorties de signalisation non canoniques de polarité planaire (PCP) et Wnt/Ca²⁺. La signalisation dépendante de DVL3 influence le remodelage du cytosquelette, le trafic vésiculaire et l’orientation du fuseau mitotique, ce qui l’associe à la mise en place des patrons de développement et à l’homéostasie tissulaire. Une activité Wnt–Dishevelled dérégulée, notamment via une expression modifiée de DVL3 ou un recâblage des voies, est fréquemment étudiée dans des contextes tels que la biologie tumorale, l’invasivité et des programmes de différenciation aberrants.

Dvl-3/Dishevelled 3/DVL3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DVL3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Dvl-3/Dishevelled 3/DVL3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DVL3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DVL3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Dvl-3/Dishevelled 3/DVL3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DVL3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Dvl-3/Dishevelled 3/DVL3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Dvl-3/Dishevelled 3/DVL3 dans les cellules tumorales présentant une expression de DVL3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.