DUSP22 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-430587

Übersicht

Dusp22 kodiert die Dual-Spezifitäts-Phosphatase 22 (DUSP22), eine atypische MAPK-Phosphatase, die phosphorylierungsabhängige Signalwege moduliert, indem sie bei ausgewählten Substraten Serin/Threonin- und Tyrosinreste dephosphoryliert. In murinen Immun- und Nicht-Immunzellen wurde DUSP22 mit der Regulation der Dynamik des MAPK-Signalwegs in Verbindung gebracht, einschließlich stress- und mitogen-reaktiver Signalknoten, die transkriptionelle Outputs wie Zytokinprogramme, Aktivierungsschwellen und Apoptose prägen. Über seinen Einfluss auf das Gleichgewicht zwischen Kinasen und Phosphatasen wirkt DUSP22 auf Entscheidungen zur Zellproliferation und -differenzierung ein, die bei entzündlichen Erkrankungen und in der Krebsbiologie häufig gestört sind. Eine veränderte DUSP22-Signalgebung wurde mit Immundysregulation und einer onkogenen Umverdrahtung von Signalwegen assoziiert und ist damit relevant für mechanistische Studien signalabhängiger Phänotypen.

Das DUSP22 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Dusp22-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Dusp22-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Dusp22 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die DUSP22-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Dusp22-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der DUSP22-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Dusp22-Exone abzielen, die für die DUSP22-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Dusp22-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom DUSP22 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom DUSP22 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Dusp22-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das DUSP22 HDR-Plasmid (m) und DUSP22 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Dusp22-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Dusp22-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.