DUOX1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402745

Übersicht

DUOX1 (Dual Oxidase 1) kodiert eine membranassoziierte NADPH-Oxidase, die an der Zelloberfläche Wasserstoffperoxid erzeugt und damit zur Redox-Signalgebung sowie zur Wirtsabwehr an mukosalen und epithelialen Barrieren beiträgt. Seine peroxidaseähnliche Domäne und die EF-Hand-Calciumbindungsmotive ermöglichen eine regulierte ROS-Produktion, die angeborene Immunantworten, epitheliale Differenzierung und Wundheilungsprogramme beeinflusst. Von DUOX1 abgeleitete Oxidantien modulieren Signalwege wie MAPK- und NF-κB-Kaskaden und können die Expression von Zytokinen und Chemokinen in Atemwegs- und gastrointestinalen Geweben beeinflussen. Eine Fehlregulation der DUOX1-Aktivität und veränderte oxidative Mikroumgebungen wurden mit der Biologie entzündlicher Atemwegserkrankungen sowie mit krebsrelevanten Veränderungen in Verbindung gebracht, darunter epigenetische Stilllegung und Verschiebungen in oxidativen Stressantworten.

Das DUOX1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des DUOX1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des DUOX1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von DUOX1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die DUOX1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von DUOX1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der DUOX1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf DUOX1-Exone abzielen, die für die DUOX1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere DUOX1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom DUOX1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom DUOX1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des DUOX1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das DUOX1 HDR-Plasmid (h) und DUOX1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von DUOX1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten DUOX1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.