DSCAM Double Nickase Plasmid (h): sc-403385-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das DSCAM Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- DSCAM Double-Nickase-Plasmid (h) und DSCAM Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf DSCAM abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
DSCAM Double Nickase Plasmid (h) | sc-403385-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DSCAM Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403385-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DSCAM (Down-Syndrom-Zelladhäsionsmolekül) ist ein Rezeptor der Immunglobulin-Superfamilie, der während der Neuroentwicklung die Zell-Zell-Erkennung und -Adhäsion vermittelt. In menschlichen Neuronen unterstützt DSCAM das Neuritenauswachsen, die Axonführung, die dendritische Verzweigung (Arborisierung) und die synaptische Organisation, indem es kontaktabhängige Signalgebung und zytoskelettale Dynamik koordiniert. Über seine extrazellulären Bindungs- und intrazellulären Signalinterfaces trägt DSCAM zu Signalwegen bei, die die Spezifität der neuronalen Verschaltung und den Aufbau neuronaler Schaltkreise steuern. Eine fehlregulierte DSCAM-Dosis oder -Funktion wurde mit neuroentwicklungsbedingten Phänotypen in Verbindung gebracht, einschließlich Merkmalen, die mit dem Down-Syndrom sowie mit autismusspektrumbezogenen Veränderungen von Synapsen und Konnektivität assoziiert sind.
DSCAM Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DSCAM-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DSCAM abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DSCAM-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DSCAM-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.