DPEP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407451

Übersicht

DPEP1 (Dipeptidase 1) kodiert eine membranverankerte Zink-Metalloprotease, die überwiegend an der apikalen Oberfläche von Epithelzellen lokalisiert ist und dort eine Reihe von Dipeptiden sowie glutathionkonjugierten Metaboliten hydrolysiert. Über seine enzymatische Aktivität trägt DPEP1 zum Peptidumsatz und zum Xenobiotika-Stoffwechsel bei und greift dabei in glutathionabhängige Entgiftungsprozesse sowie epitheliale Transportfunktionen ein. Veränderungen der DPEP1-Expression wurden in mehreren von Epithelien abgeleiteten Malignomen und in entzündlichen Kontexten beschrieben, was dieses Enzym mit einem Umbau des perizellulären Mikromilieus und einer veränderten metabolischen Verarbeitung in Verbindung bringt. Als Ektoenzym mit definierten katalytischen Motiven stellt DPEP1 einen gut untersuchbaren Ansatzpunkt dar, um die Biologie membranständiger Proteasen, Reaktionen auf metabolischen Stress und Differenzierungszustände von Epithelzellen zu erforschen.

Das DPEP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des DPEP1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des DPEP1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von DPEP1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die DPEP1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von DPEP1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der DPEP1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf DPEP1-Exone abzielen, die für die DPEP1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere DPEP1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom DPEP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom DPEP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des DPEP1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das DPEP1 HDR-Plasmid (h) und DPEP1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von DPEP1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten DPEP1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.