Plásmido Doble Nickase (h) DOT1L1: sc-403286-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)DOT1L1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa DOT1L1 (h) y el plásmido de doble nickasa DOT1L1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a DOT1L. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: DOT1L1 Anticuerpo (E-5): sc-374317
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) DOT1L1 | sc-403286-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) DOT1L1 | sc-403286-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DOT1L codifica DOT1L1, una metiltransferasa de lisina que cataliza la mono-, di- y trimetilación de la lisina 79 de la histona H3 (H3K79), una marca de cromatina asociada con la transcripción activa. A través de la regulación de programas de expresión génica, DOT1L influye en la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN, la diferenciación hematopoyética y las redes transcripcionales del desarrollo. La metilación de H3K79 dependiente de DOT1L se integra con el control epigenético de la elongación de la ARN polimerasa II y de la accesibilidad de la cromatina, configurando estados transcripcionales específicos de linaje. La actividad desregulada de DOT1L y los patrones alterados de metilación de H3K79 se han implicado en programas transcripcionales oncogénicos, incluidos los asociados a leucemias con reordenamientos de MLL, lo que respalda su relevancia en la investigación en epigenética y biología del cáncer.
DOT1L1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DOT1L en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DOT1L. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DOT1L. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DOT1L alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.