Plásmido CRISPR de Activación (m2) DOCK 2: sc-430116-ACT-2

Dock2 en el ratón codifica DOCK2, un factor de intercambio de nucleótidos de guanina restringido al linaje hematopoyético que activa las GTPasas Rac para controlar la remodelación del citoesqueleto de actina y la migración direccional en linfocitos, neutrófilos y otras células inmunitarias. DOCK2 actúa aguas abajo de los receptores de quimiocinas y de la señalización de los receptores de antígeno, coordinando la adhesión dependiente de integrinas, la formación de la sinapsis inmunológica y el tráfico a través de los tejidos linfoides mediante vías que conectan la señalización de PI3K con la regulación de las GTPasas de la familia Rho. La alteración genética y funcional de DOCK2 se asocia con respuestas inmunitarias innata y adaptativa deterioradas y se ha implicado en fenotipos inflamatorios y tipo autoinmune, susceptibilidad a infecciones y vigilancia inmunitaria antitumoral alterada en sistemas experimentales. La edición genética del gen Dock2 en ratón respalda estudios mecanísticos de la motilidad leucocitaria, la quimiotaxis y el reconfiguramiento de redes de señalización, permitiendo disecciones intrínsecas de células inmunitarias en modelos de investigación de inflamación, interacciones huésped–patógeno e inmuno-oncología.

DOCK 2 El plásmido de activación CRISPR (m2) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Dock2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

DOCK 2 El plásmido de activación CRISPR (m2) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Dock2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Dock2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de DOCK 2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Dock2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de DOCK 2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía DOCK 2 en células tumorales con expresión de Dock2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.