Partículas Lentivirales de Activación (h) DOCK 11: sc-406204-LAC

DOCK11 codifica el “Dedicator of Cytokinesis 11”, un factor de intercambio de nucleótidos de guanina que activa las GTPasas de la familia Rho, en particular CDC42, para coordinar la remodelación del citoesqueleto de actina, la polaridad celular y la migración direccional. A través de sus dominios DHR-1 y DHR-2, DOCK11 conecta la señalización por fosfoinosítidos con la activación de GTPasas, influyendo en la dinámica de adhesión, el tráfico de células inmunitarias y las salidas de señalización impulsadas por receptores. La alteración de la actividad de DOCK11 se ha investigado en contextos de función leucocitaria desregulada y control anómalo del citoesqueleto, lo que lo hace relevante para estudios de señalización inmunitaria, motilidad celular y programas de tráfico de membrana. Como regulador nodal de las vías de pequeñas GTPasas, DOCK11 se examina con frecuencia en trabajos mecanísticos que conectan la organización del citoesqueleto con fenotipos dependientes de la señalización.

Las partículas de activación lentiviral DOCK 11 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de DOCK11 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral DOCK 11 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción DOCK11, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de DOCK 11. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo DOCK11 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.