DOC4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406806

Descripción general

TENM4 codifica la proteína transmembrana teneurina 4 (DOC4), una gran proteína de membrana de tipo II implicada en la comunicación célula–célula, la adhesión y las señales de guía que influyen en el patrónamiento tisular y la conectividad neuronal. Mediante interacciones mediadas por sus dominios extracelulares y por motivos de señalización intracelular, DOC4 contribuye a la organización del citoesqueleto, el crecimiento de neuritas y el mantenimiento de la polaridad celular. La alteración de la expresión de TENM4 o variaciones en su secuencia se han asociado con fenotipos neurológicos y también se han descrito en estudios del comportamiento de células tumorales, lo que respalda su relevancia en programas de migración e invasión. Estas propiedades hacen de TENM4 un objetivo útil para desentrañar vías que vinculan la señalización dependiente de la adhesión con el desarrollo y la remodelación celular asociada a enfermedades.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO DOC4 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TENM4 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TENM4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TENM4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína DOC4.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TENM4 para la investigación de la señalización de DOC4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TENM4 críticos para la función de DOC4
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TENM4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido DOC4 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido DOC4 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TENM4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR DOC4 (h) y el plásmido HDR DOC4 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TENM4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TENM4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.