DNase II CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405046-ACT

Humanes **DNASE2** kodiert **DNase II**, eine lysosomale saure Endonuklease, die DNA aus apoptotischen Zellen, aufgenommenen Zellkernen und anderen extrazellulären oder vesikulären Quellen nach der Phagozytose abbaut. Durch die Beseitigung von DNA in endolysosomalen Kompartimenten trägt DNase II zur Aufrechterhaltung der Nukleinsäure-Homöostase bei und begrenzt eine fehlgeleitete Aktivierung der angeborenen Immunerkennung sowie nachgeschalteter inflammatorischer Signalwege. Eine Störung oder Dysregulation der DNASE2-Aktivität wurde mit defekter DNA-Clearance, einer verstärkten Interferon-stimulierten Genexpression und entzündlichen Phänotypen in Verbindung gebracht, die für Autoimmunität und hämatologischen Stress relevant sind. Die Funktion von DNase II wird daher häufig im Kontext von Apoptose, Efferzytose, Lysosomenbiologie und nukleinsäuregetriebener Immunregulation untersucht.

DNase II Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen DNASE2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

DNase II Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des DNASE2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der DNASE2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen DNase II-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native DNASE2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von DNase II-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des DNase II-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem DNASE2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.