Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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DNA Ligase III Double Nickase Plasmid (h): sc-402841-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das DNA Ligase III Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- DNA Ligase III Double-Nickase-Plasmid (h) und DNA Ligase III Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf LIG3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: DNA Ligase III: sc-390922
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
DNA Ligase III Double Nickase Plasmid (h) | sc-402841-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DNA Ligase III Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402841-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LIG3 kodiert die humane DNA-Ligase III, eine ATP-abhängige Ligase, die Einzelstrangbrüche während der Basenexzisionsreparatur verschließt und über Interaktionen mit XRCC1 die Reparatur oxidativer DNA-Schäden koordiniert. DNA-Ligase III trägt zudem zum alternativen End-Joining bei und ist an Prozessen der Genomstabilisierung beteiligt, die Replikationsgabeln schützen und die chromosomale Stabilität bewahren. Ihre mitochondriale Isoform unterstützt die Reparatur und Integrität der mitochondrialen DNA und verknüpft die Funktion von LIG3 mit der zellulären Bioenergetik und Stressantworten. Eine Fehlregulation oder ein Verlust der LIG3-Aktivität ist mit verstärkter DNA-Schadenssignalgebung, erhöhter Mutationslast und Phänotypen genomischer Instabilität assoziiert, die für die Krebsbiologie und die Forschung zu neurodegenerativen Erkrankungen relevant sind.
DNA Ligase III Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des LIG3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von LIG3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die LIG3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit LIG3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.