DMP-1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402197-ACT

DMP1 kodiert das saure Phosphoprotein 1 der Dentinmatrix (Dentin Matrix Acidic Phosphoprotein 1; DMP-1), ein Phosphoprotein der extrazellulären Matrix, das während der Skelett- und Zahnentwicklung die Mineralablagerung und die Phosphat-Homöostase reguliert. DMP-1 wird in funktionelle Fragmente prozessiert, die über Interaktionen mit Calcium/Phosphat und Matrixkomponenten die Osteozytenreifung, die Dentinogenese und die Organisation von Hydroxylapatit beeinflussen. Im Knochen ist DMP-1 mit osteozytengesteuerten Signalnetzwerken verbunden, die die Matrixmineralisierung mit phosphatregulatorischen Signalwegen koppeln, einschließlich der Modulation von FGF23-assoziierten Prozessen. Eine veränderte DMP1-Expression oder -Funktion ist mit Störungen der Knochenmineraldichte und der Dentinbildung assoziiert, was seine Bedeutung für Studien zur Mineralisierungsbiologie und zu erblichen Skelettphänotypen unterstreicht.

DMP-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen DMP1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

DMP-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des DMP1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der DMP1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen DMP-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native DMP1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von DMP-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des DMP-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem DMP1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.