DHODH Double Nickase Plasmid (h): sc-402983-NIC

Die humane DHODH (Dihydroorotat-Dehydrogenase) ist ein Flavoprotein der inneren Mitochondrienmembran, das in der de-novo-Pyrimidinbiosynthese die geschwindigkeitsbestimmende Oxidation von Dihydroorotat zu Orotat katalysiert und dabei die Nukleotidproduktion über Ubichinon an die Atmungskette koppelt. Durch die Kontrolle der UMP-Verfügbarkeit beeinflusst DHODH die DNA-/RNA-Synthese, das Fortschreiten der S-Phase und die Proliferationsfähigkeit und trägt unter Nährstoffstress zu einer metabolischen Umprogrammierung bei. Die DHODH-Aktivität verknüpft die mitochondriale Bioenergetik mit der Nukleotidhomöostase und kann über den Elektronentransfer zur Elektronentransportkette das Redoxgleichgewicht modulieren. Eine dysregulierte Pyrimidinverwertung und eine veränderte Abhängigkeit von DHODH wurden in Zusammenhängen mit schneller Zellteilung und mitochondrialer Dysfunktion beschrieben, was DHODH zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung metabolischer Verwundbarkeiten und der Zellzyklusregulation macht.

DHODH Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DHODH-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DHODH abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DHODH-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DHODH-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.