desmoplakin I/II Double Nickase Plasmid (h): sc-400818-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das desmoplakin I/II Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- desmoplakin I/II Double-Nickase-Plasmid (h) und desmoplakin I/II Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf DSP abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: desmoplakin I/II: sc-390975
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
desmoplakin I/II Double Nickase Plasmid (h) | sc-400818-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
desmoplakin I/II Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400818-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DSP kodiert Desmoplakin I/II, eine zentrale Komponente der Plakin-Familie in Desmosomen, die Intermediärfilamente an desmosomale Plaques verankert und so die mechanische Integrität von Epithelien und Herzgewebe aufrechterhält. Indem Desmoplakin Keratin- oder Desminnetzwerke mit Desmoglein/Desmocollin–Plakoglobin–Plakophilin-Komplexen verbindet, unterstützt es die Stabilität der Zellkontakte, die Organisation des Zytoskeletts sowie mechanotransduktive Signalwege, die die Gewebewiderstandsfähigkeit koordinieren. Eine Störung von DSP beeinträchtigt den Aufbau von Desmosomen und die Anheftung der Intermediärfilamente, was zu Defekten der Zell‑Zell‑Adhäsion und zu veränderten Stress-Signalen führt. Eine DSP-Dysfunktion ist mit erblichen und erworbenen Erkrankungen verbunden, die durch Hautfragilität und kardiomyopathische Phänotypen gekennzeichnet sind, und stellt damit ein wichtiges Ziel für die Untersuchung der Kontaktstellenbiologie und der Mechanismen der Gewebeintegrität dar.
desmoplakin I/II Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DSP-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DSP abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DSP-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DSP-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.