desmoplakin I/II CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-430943
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- desmoplakin I/II Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im desmoplakin I/II-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
desmoplakin I/II CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-430943 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Das Mausgen **Dsp** kodiert **Desmoplakin I/II**, einen zentralen Zytolinker der Desmosomen, der Intermediärfilamente an desmosomale Cadherin–Plakoglobin/Plakophilin-Komplexe verankert und so die Gewebeintegrität unter mechanischer Belastung unterstützt. Desmoplakin reguliert die Zell-Zell-Adhäsion, die Organisation des Zytoskeletts und Signalnetzwerke an Zellkontakten, die die Architektur von Epithelien und Herzmuskelgewebe koordinieren. Eine Störung der Desmosomenfunktion verändert Mechanotransduktion und Barriereeigenschaften und beeinflusst Prozesse wie epidermale Differenzierung, Wundantwort und die Kopplung von Kardiomyozyten. Eine Dsp-Fehlfunktion wird häufig als Modell für desmosomenassoziierte Pathobiologie genutzt, einschließlich Hautfragilitäts-Phänotypen und kardiomyopathieassoziierter Defekte an Zellkontakten.
Das desmoplakin I/II CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Dsp-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Dsp-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Dsp nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die desmoplakin I/II-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Dsp-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der desmoplakin I/II-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Dsp-Exone abzielen, die für die desmoplakin I/II-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Dsp-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom desmoplakin I/II CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom desmoplakin I/II CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Dsp-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das desmoplakin I/II HDR-Plasmid (m) und desmoplakin I/II HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Dsp-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Dsp-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.