Derlin-2 Double Nickase Plasmid (h): sc-408875-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Derlin-2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Derlin-2 Double-Nickase-Plasmid (h) und Derlin-2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf DERL2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Derlin-2: sc-398573
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Derlin-2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-408875-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Derlin-2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-408875-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das menschliche Gen **DERL2** kodiert **Derlin-2**, ein multipassiges Membranprotein des endoplasmatischen Retikulums, das an der ER-assoziierten Degradation (ERAD) beteiligt ist, indem es die Retrotranslokation fehlgefalteter luminaler und membranständiger Proteine für den Ubiquitin-Proteasom-Abbau erleichtert. Derlin-2 wirkt dabei zusammen mit p97/VCP, Ubiquitin-Ligasen und assoziierten Adaptoren, um während der Antwort auf fehlgefaltete Proteine (unfolded protein response, UPR) die Proteostase aufrechtzuerhalten und ER-Stress-Signale zu begrenzen. Über seine Rolle in der Qualitätskontrolle sekretorischer und membranständiger Proteine beeinflusst **DERL2** Signalwege, die mit zellulärer Stressanpassung, Entzündung und Antigenprozessierung verknüpft sind. Eine dysregulierte ERAD-Kapazität und chronischer ER-Stress werden in Modellen der Krebsbiologie, Neurodegeneration und metabolischer Erkrankungen mitbeteiligt, was **DERL2** zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien proteostaseabhängiger Phänotypen macht.
Derlin-2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DERL2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DERL2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DERL2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DERL2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.