DEPDC5 Double Nickase Plasmid (h): sc-402806-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das DEPDC5 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- DEPDC5 Double-Nickase-Plasmid (h) und DEPDC5 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf DEPDC5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
DEPDC5 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402806-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DEPDC5 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402806-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DEPDC5 (DEP domain containing 5) kodiert eine zentrale Komponente des GATOR1-Komplexes, einem negativen Regulator der mTORC1-Signalübertragung nachgeschaltet an die Aminosäure-Sensorik an der lysosomalen Oberfläche. Als GTPase-aktivierender Faktor (GAP) für Rag-GTPasen trägt DEPDC5 dazu bei, nährstoffgetriebene mTORC1-Aktivität zu begrenzen, und beeinflusst damit Autophagie, Proteinsynthese und die Kontrolle des Zellwachstums. Störungen von DEPDC5 wurden mit einer fehlregulierten Signalgebung im mTOR-Signalweg und veränderter neuronaler Erregbarkeit in Verbindung gebracht; genetische Assoziationen wurden unter anderem bei fokalen Epilepsien und kortikalen Fehlbildungen beschrieben. Diese Eigenschaften machen DEPDC5 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien zur Regulation von mTORC1, zur Signalweg-Überkreuzkommunikation im Stoffwechsel sowie zu neuroentwicklungsbezogenen Störungen von Signalwegen.
DEPDC5 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DEPDC5-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DEPDC5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DEPDC5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DEPDC5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.