Plásmido CRISPR de Activación (h) Deltex-1: sc-404446-ACT

El gen humano DTX1 codifica Deltex-1, una ligasa E3 de ubiquitina que actúa como un modulador clave de la señalización del receptor Notch y de los programas transcripcionales posteriores que gobiernan las decisiones de destino celular, la diferenciación y la regulación inmunitaria. Mediante el control dependiente de ubiquitina de componentes de la vía Notch, Deltex-1 influye en la duración e intensidad de la señal, conectándose con la proteostasis y con redes de regulación transcripcional. La actividad alterada de DTX1/Deltex-1 se ha asociado con contextos de señalización Notch desregulada relevantes para la biología de células hematopoyéticas e inmunitarias, y se investiga con frecuencia en modelos de reconfiguración oncogénica de vías y de señalización inflamatoria. Estas propiedades hacen de DTX1 una diana útil para estudios mecanísticos que vinculan la ubiquitinación con fenotipos dependientes de vías de señalización.

Deltex-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DTX1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Deltex-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DTX1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DTX1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Deltex-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DTX1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Deltex-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Deltex-1 en células tumorales con expresión de DTX1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.