Plasmide Double Nickase (h) DDX33: sc-404530-NIC

DHX33 (DDX33) code une hélicase d’ARN humaine de la famille DEAD-box, qui couple le remodelage de l’ARN dépendant de l’ATP à la biogenèse des ribosomes et au métabolisme de l’ARN. DDX33 a été impliquée dans la fonction nucléolaire, la transcription et la maturation de l’ARNr, ainsi que dans la coordination de la capacité de traduction avec les signaux prolifératifs, reliant l’homéostasie de l’ARN à la progression du cycle cellulaire. Au-delà de ses rôles d’entretien, DDX33 participe aux voies de détection de l’immunité innée en soutenant des signalisations dépendantes de l’ARN et peut influencer des programmes transcriptionnels inflammatoires. Une expression ou une activité dérégulée de DDX33 a été associée à des altérations du contrôle de la croissance et des réponses au stress dans des contextes pertinents pour le cancer, ce qui en fait un nœud utile pour disséquer des phénotypes induits par le traitement de l’ARN.

DDX33 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DHX33 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DHX33. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DHX33. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DHX33.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.