DDI1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-428086

Descripción general

El DDI1 de ratón (homólogo 1 inducible por daño en el ADN) codifica una proteína conservada implicada en la proteostasis dependiente de ubiquitina a través de sus dominios tipo ubiquitina (ubiquitin-like) y asociados a ubiquitina (ubiquitin-associated), así como de una región similar a una proteasa retroviral. DDI1 se ha vinculado con la regulación del recambio proteico, la adaptación al estrés y la interacción con las respuestas al daño del ADN, en consonancia con funciones en el mantenimiento del control de calidad proteica y la homeostasis celular. La alteración de vías asociadas a DDI1 puede influir en la acumulación de proteínas ubiquitinadas y en las salidas de señalización de estrés, aspectos relevantes para modelos de neurodegeneración, biología del cáncer y respuestas inflamatorias. En sistemas murinos, DDI1 constituye un nodo manejable para estudiar cómo las vías mediadas por ubiquitina se intersectan con la estabilidad del genoma y el estrés proteotóxico.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO DDI1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ddi1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ddi1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ddi1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína DDI1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ddi1 para la investigación de la señalización de DDI1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ddi1 críticos para la función de DDI1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ddi1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido DDI1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido DDI1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ddi1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR DDI1 (m) y el plásmido HDR DDI1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ddi1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ddi1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.