Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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dCK Double Nickase Plasmid (h): sc-417715-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das dCK Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- dCK Double-Nickase-Plasmid (h) und dCK Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf DCK abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: dCK: sc-393099
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
dCK Double Nickase Plasmid (h) | sc-417715-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
dCK Double Nickase Plasmid (h2) | sc-417715-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Die Desoxycytidin-Kinase (DCK) kodiert dCK, eine zytosolische Nukleosidkinase, die die Phosphorylierung von Desoxycytidin sowie verwandten Purin- und Pyrimidin-Desoxynukleosiden katalysiert und damit das Desoxynukleotid‑Salvage sowie die dNTP‑Homöostase unterstützt. Indem dCK Substrate in den Nukleotidstoffwechsel einspeist, trägt es zur Aufrechterhaltung der DNA-Replikation und -Reparatur bei und beeinflusst zelluläre Antworten auf Replikationsstress. Die DCK-Aktivität ist eng mit proliferationsassoziiertem metabolischem Remodeling und dem mitochondrial-nukleären Nukleotidgleichgewicht verknüpft. Eine dysregulierte DCK-Expression oder -Funktion wurde mit veränderten Nukleotidpools in Verbindung gebracht und in hämatologischen Malignomen, der Immunbiologie sowie der metabolischen Tumoranpassung untersucht, wobei die Abhängigkeit vom Salvage-Weg die genomische Stabilität und Zellzustandsübergänge prägen kann.
dCK Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DCK-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DCK abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DCK-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DCK-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.