DBT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-410755

Übersicht

Die Dihydrolipoamid-Transacylase E2 für verzweigtkettige Substrate (DBT) ist die E2-Kernkomponente des mitochondrialen Branched-Chain-α-Ketosäure-Dehydrogenase-(BCKDH)-Komplexes und katalysiert Acyltransfer-Schritte, die für den Abbau verzweigtkettiger Aminosäuren essenziell sind. DBT unterstützt den mitochondrialen Kohlenstofffluss und das Redoxgleichgewicht, indem es die effiziente Oxidation von aus Leucin, Isoleucin und Valin stammenden Ketosäuren ermöglicht und so die Aminosäurenverwertung mit der Energieproduktion verknüpft. Seine Aktivität ist mit der regulatorischen Phosphorylierung des BCKDH-Komplexes koordiniert und beeinflusst metabolische Stressantworten, die mitochondriale Funktion sowie Nährstoffsensorik-Signalwege. Eine Störung oder veränderte Regulation von DBT und verwandten BCKDH-Komponenten ist mit angeborenen Stoffwechselerkrankungen verbunden, die die Homöostase verzweigtkettiger Aminosäuren beeinträchtigen, und wird häufig im Kontext metabolischer Umprogrammierung und mitochondrialer Dysfunktion untersucht.

Das DBT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des DBT-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des DBT-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von DBT nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die DBT-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von DBT-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der DBT-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf DBT-Exone abzielen, die für die DBT-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere DBT-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom DBT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom DBT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des DBT-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das DBT HDR-Plasmid (h) und DBT HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von DBT-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten DBT-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.