DBT Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-410755

Panoramica

La diidrolipoamide transacilasi E2 degli aminoacidi a catena ramificata (DBT) è la componente centrale E2 del complesso mitocondriale della deidrogenasi degli α-chetoacidi a catena ramificata (BCKDH) e catalizza le fasi di trasferimento acilico essenziali per il catabolismo degli aminoacidi a catena ramificata. DBT sostiene il flusso di carbonio mitocondriale e l’equilibrio redox consentendo l’ossidazione efficiente degli chetoacidi derivati da leucina, isoleucina e valina, collegando l’utilizzo degli aminoacidi alla produzione di energia. La sua attività è coordinata con la fosforilazione regolatoria del BCKDH e influenza le risposte allo stress metabolico, la funzione mitocondriale e le vie di sensing dei nutrienti. L’alterazione o la disregolazione di DBT e di altri componenti del BCKDH è associata a errori congeniti del metabolismo che compromettono l’omeostasi degli aminoacidi a catena ramificata ed è spesso studiata nel contesto del rimodellamento metabolico e della disfunzione mitocondriale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DBT (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DBT in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DBT insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DBT a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DBT.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DBT per lo studio della segnalazione di DBT, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni DBT critici per la funzione di DBT
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DBT per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal DBT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal DBT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DBT. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal DBT Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR DBT (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DBT per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DBT definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.