DBR1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407375

Descripción general

DBR1 codifica la enzima 1 de desramificación de lazos (lariats) de ARN, una fosfodiesterasa conservada que hidroliza el enlace fosfodiéster 2′–5′ en los puntos de ramificación de los intrones en lazo para linearizar los intrones escindidos y permitir su degradación. Esta actividad vincula a DBR1 con el procesamiento de ARN dependiente del espliceosoma, las vías de degradación de intrones y el mantenimiento de la homeostasis del ARN, lo que puede influir en los programas de expresión génica. La alteración de la desramificación de lariats puede modificar el equilibrio entre especies de ARN circulares y lineales y remodelar la regulación postranscripcional en contextos de estrés y diferenciación. En consecuencia, la disfunción de DBR1 se ha asociado en la literatura con fenotipos neurológicos y de susceptibilidad a virus, lo que respalda su relevancia para estudios mecanísticos del metabolismo del ARN en tipos celulares pertinentes para enfermedades.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO DBR1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DBR1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DBR1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DBR1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína DBR1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DBR1 para la investigación de la señalización de DBR1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de DBR1 críticos para la función de DBR1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DBR1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido DBR1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido DBR1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DBR1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR DBR1 (h) y el plásmido HDR DBR1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DBR1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DBR1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.