Plasmide CRISPR d'Activation (h) DACH1: sc-404712-ACT

DACH1 (Dachshund family transcription factor 1) code un régulateur nucléaire liant l’ADN qui module les programmes de mise en place des patrons du développement et les décisions de destinée cellulaire en coordonnant des réseaux transcriptionnels. Dans les cellules humaines, DACH1 influence la prolifération, la différenciation et l’état épithélio-mésenchymateux via des interactions avec la signalisation des récepteurs hormonaux et des complexes régulateurs associés à la chromatine, en affectant des voies qui gouvernent la progression du cycle cellulaire et l’engagement de lignée. Une expression ou une activité dérégulée de DACH1 a été associée à une altération de l’homéostasie tissulaire et à des phénotypes liés aux tumeurs dans de multiples contextes cancéreux, où elle peut influencer l’invasion, le contrôle de la croissance et les programmes transcriptionnels. En tant que nœud de voie intégrant la transcription développementale à la signalisation oncogénique, DACH1 est fréquemment étudié dans des travaux portant sur la régulation transcriptionnelle, la plasticité cellulaire et le remodelage, dépendant du contexte, des réseaux de gènes.

DACH1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DACH1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DACH1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DACH1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DACH1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DACH1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DACH1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DACH1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DACH1 dans les cellules tumorales présentant une expression de DACH1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.