Plasmide CRISPR/Cas9 KO D54 (m): sc-425948

Présentation

Tpd52l2 code pour D54, un membre de la famille des protéines tumorales D52, impliquée dans la régulation du trafic vésiculaire, de la dynamique membranaire et des processus sécrétoires qui influencent la croissance et la différenciation cellulaires. D54 a été associée à des voies qui contrôlent le transport intracellulaire et l’organisation du cytosquelette, favorisant l’acheminement coordonné de composants de signalisation et de protéines membranaires. Une expression altérée des protéines de la famille D52 est fréquemment observée dans des contextes prolifératifs et métaboliques, faisant de Tpd52l2 un nœud utile pour étudier le dérèglement du contrôle du cycle cellulaire et le remodelage adaptatif en réponse au stress. Dans les systèmes murins, Tpd52l2 constitue une cible aisément exploitable pour analyser comment des protéines associées au trafic modulent la sortie des signaux et l’homéostasie tissulaire dans des modèles pertinents pour les maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO D54 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tpd52l2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tpd52l2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tpd52l2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine D54.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tpd52l2 pour l'étude de la signalisation de D54, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Tpd52l2 essentiels à la fonction de D54
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tpd52l2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le D54 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le D54 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tpd52l2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le D54 plasmide HDR (m) et le D54 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tpd52l2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tpd52l2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.