Plásmido CRISPR de Activación (h) Cytokeratin 6C: sc-401652-ACT

KRT6C codifica la citoqueratina 6C, una proteína de filamento intermedio tipo II que forma heterodímeros con queratinas tipo I para construir el citoesqueleto de queratina en epitelios estratificados. Esta red estructural aporta resistencia mecánica, coordina la remodelación del citoesqueleto durante la reparación de heridas y se acopla a desmosomas y hemidesmosomas para mantener la integridad tisular. Los miembros de la familia de citoqueratinas 6 se asocian comúnmente con programas de hiperproliferación y respuesta al estrés en queratinocitos, y se han observado patrones desregulados de expresión de queratinas en diversos estados inflamatorios de la piel y patologías epiteliales. Como efector del citoesqueleto, KRT6C ofrece una herramienta manejable para estudiar la organización de los filamentos dependiente de la diferenciación, la biología de la barrera y la señalización de estrés en sistemas modelo epiteliales.

Cytokeratin 6C El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KRT6C sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Cytokeratin 6C El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KRT6C en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KRT6C, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Cytokeratin 6C. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KRT6C y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Cytokeratin 6C en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Cytokeratin 6C en células tumorales con expresión de KRT6C silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.