Cytokeratin 6A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401650

Übersicht

KRT6A kodiert Zytokeratin 6A, ein Intermediärfilamentprotein des Typs II, das mit Keratinen des Typs I Heterodimere bildet und so das Keratin-Zytoskelett in mehrschichtigen Epithelien aufbaut. Zytokeratin 6A trägt zur mechanischen Widerstandsfähigkeit bei, koordiniert den Umbau des Zytoskeletts während der Wundheilung und steht in Wechselwirkung mit der Organisation von Zellkontakten sowie Stressantwort-Programmen, die die epitheliale Differenzierung prägen. Seine Expression wird häufig in hyperproliferativen Keratinozyten induziert, wodurch KRT6A mit Signalwegen verknüpft ist, die die epitheliale Regeneration und die Aufrechterhaltung der Barrierefunktion steuern. Eine Fehlregulation von Keratin 6A ist an erblichen und erworbenen Verhornungsstörungen beteiligt und wird häufig im Kontext epithelialer Tumoren beobachtet, was es für Studien zur epithelialen Plastizität und krankheitsassoziierten Veränderungen des Zytoskeletts relevant macht.

Das Cytokeratin 6A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des KRT6A-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des KRT6A-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von KRT6A nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Cytokeratin 6A-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von KRT6A-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Cytokeratin 6A-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf KRT6A-Exone abzielen, die für die Cytokeratin 6A-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere KRT6A-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Cytokeratin 6A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Cytokeratin 6A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des KRT6A-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Cytokeratin 6A HDR-Plasmid (h) und Cytokeratin 6A HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von KRT6A-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten KRT6A-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.