Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
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Plásmido CRISPR de Activación (h) Cytokeratin 20: sc-401153-ACT
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmdo de Activación CRISPR (h) Cytokeratin 20 es un sistema de activación de la trascripción mediante una activación sinérgica (SAM), diseñado para incrementar la expresión de un gen concreto
- Los Plásmdo de Activación CRISPR (h) Cytokeratin 20 incluyen los siguientes tres plásmidos, con un radio 1:1:1 : plásmido codificador de la nucleasa Cas 9 desactivada (dCas9), (D10A y N863A) fusionadas al dominio de transactivación VP64 y el gen de resistencia a blasticidina; plásmido codificador de la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 y el gen de resistencia a Higromicina; plásmido codificador de la secuencia diana específica de 20 nt de ARN y el gen de resistencia a puromicina.
- El complejo SAM resultante se une en un punto específico a unos 200 -250 nt aguas arriba del inicio de la transcripción del gen diana y ofrece un potente punto de reclutamiento de factores de transcripción para un eficiente incremento de la activación genica.
- Los gRNA codificados por el plásmido de activación CRISPR Cytokeratin 20 (h) y el plásmido de activación CRISPR Cytokeratin 20 (h2) se dirigen a regiones reguladoras distintas situadas aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción de KRT20. Puede que haya uno o ambos diseños disponibles
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Cytokeratin 20 Anticuerpo (E-9): sc-271183
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido CRISPR de Activación (h) Cytokeratin 20 | sc-401153-ACT | 20 µg | $397.00 |
KRT20 codifica la citoqueratina 20 (CK20), una proteína de filamento intermedio tipo I que contribuye a la arquitectura del citoesqueleto epitelial y a programas de diferenciación específicos de tejido. CK20 participa en el ensamblaje de filamentos de queratina y se comunica con complejos de unión para sostener la polaridad celular, la resiliencia mecánica y la función de barrera en los epitelios gastrointestinal y urotelial. Su expresión está estrictamente regulada durante la maduración epitelial y se utiliza comúnmente como marcador de linaje, reflejando cambios en el estado de diferenciación y en la remodelación del citoesqueleto. Los patrones alterados de expresión de KRT20 se asocian con desregulación epitelial en contextos de cáncer e inflamación, lo que la convierte en una lectura útil para estudios del fenotipo tumoral, la reorganización del citoesqueleto asociada a la invasión y la plasticidad epitelial.
Cytokeratin 20 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KRT20 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.
Cytokeratin 20 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KRT20 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.
Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KRT20, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Cytokeratin 20. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KRT20 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Cytokeratin 20 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Cytokeratin 20 en células tumorales con expresión de KRT20 silenciada o reducida.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.