Plásmido Doble Nickase (m) Cytokeratin 19: sc-421344-NIC

El gen murino **Krt19** codifica la citoqueratina 19 (K19), un filamento intermedio de tipo I que forma heteropolímeros obligatorios con queratinas de tipo II para sostener la arquitectura del citoesqueleto epitelial y la resistencia mecánica. K19 contribuye al control de la forma celular, a la dinámica de adhesión y a los programas de diferenciación epitelial, y su red de filamentos se conecta con nodos de señalización que regulan las respuestas al estrés, la polaridad y la remodelación del citoesqueleto. Como marcador enriquecido en epitelios simples y en ciertos estados epiteliales con rasgos de progenitor, K19 se utiliza con frecuencia para estratificar subtipos epiteliales y para monitorizar transiciones como la remodelación y el compromiso de linaje. La expresión desregulada de K19 y la organización de sus filamentos se asocian con alteraciones de la integridad epitelial y se estudian ampliamente en modelos murinos en contextos de lesión tisular, inflamación y transformación oncogénica.

Cytokeratin 19 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Krt19 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Krt19. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Krt19. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Krt19 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.