Plásmido CRISPR de Activación (h) Cytokeratin 16: sc-403138-ACT

KRT16 codifica la citoqueratina 16, una proteína de filamentos intermedios de tipo I que forma heterodímeros con miembros de la familia de queratina 6 para reforzar la red del citoesqueleto en epitelios estratificados. Se induce rápidamente durante la reparación de heridas, el estrés mecánico y la señalización inflamatoria, apoyando la proliferación y migración de los queratinocitos, así como la remodelación de la barrera. La citoqueratina 16 participa en la organización de los filamentos de queratina y en programas de diferenciación epitelial que se conectan con vías de respuesta al estrés y con la dinámica del citoesqueleto. La expresión desregulada de KRT16 se asocia con estados cutáneos hiperproliferativos y trastornos de la queratinización, lo que la convierte en un marcador útil y en un nodo funcional para estudiar la homeostasis epidérmica y las respuestas epiteliales al estrés.

Cytokeratin 16 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KRT16 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Cytokeratin 16 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KRT16 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KRT16, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Cytokeratin 16. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KRT16 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Cytokeratin 16 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Cytokeratin 16 en células tumorales con expresión de KRT16 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.