Cystinosin 더블 틈내기효소 플라스미드 (h): sc-405040-NIC

CTNS는 시스티노신(cystinosin)을 암호화하며, 시스티노신은 리소좀 막에 존재하는 H⁺ 구동성 시스틴 수송체로서 리소좀 내강에서 세포질로 시스틴을 배출해 세포 내 티올 항상성을 유지하는 데 기여합니다. 엔도리소좀 시스템 내에서 시스틴의 처리 과정을 조절함으로써 시스티노신은 리소좀 기능, 산화환원 균형, 그리고 그 하위의 세포 스트레스 반응에 영향을 미칩니다. CTNS의 이상은 리소좀 아미노산 수송을 교란하고 자가포식–리소좀 경로의 동역학을 변화시킬 수 있어, 소기관 단백질 항상성(proteostasis)을 연구하는 데 중요한 핵심 지점으로 간주됩니다. CTNS의 기능 상실(loss-of-function)은 세포 내 시스틴 축적과 다기관성 세포 기능 장애를 특징으로 하는 리소좀 축적 질환인 시스티노시스(cystinosis)와 관련되어 있습니다.

Cystinosin 더블 니카제 플라스미드(h)는 human 세포주 내 CTNS 유전자좌의 고특이성 편집을 위해 설계된 쌍을 이루는 플라스미드로 구성됩니다. 각 플라스미드는 Cas9 D10A 니카아제와 CTNS 내의 반대 DNA 가닥을 표적으로 하는 고유한 sgRNA를 발현합니다. 반대 DNA 가닥의 인접 부위로 유도될 때, 두 니카아제는 서로 어긋난 단일 가닥 절단 부위를 생성하며, 이는 함께 엇갈린 이중 가닥 절단을 유발하여 두 가이드의 조화된 표적 활성을 필요로 합니다. 이렇게 생성된 DNA 절단은 내인성 세포 복구 경로, 특히 비동형 말단 결합(NHEJ)을 통해 해결되며, 이는 CTNS의 기능을 방해하는 삽입 또는 결실을 초래한다. 표적 부위에서 이중 sgRNA 결합을 요구함으로써, 이중 니킹 접근법은 편집 특이성을 향상시키고 표적 정밀도에 대한 추가적인 제어가 필요한 응용을 위한 보완적인 CRISPR 전략을 제공한다.

편집된 세포를 효율적으로 식별할 수 있도록, 한 플라스미드는 형광 시각화를 위한 GFP를 발현하며, 다른 플라스미드는 항생제 선별을 위한 푸로마이신 내성 유전자를 포함하고 있습니다. 이러한 기능들은 공동 형질 도입된 세포 집단의 효율적인 농축을 지원하며, CTNS 기능이 손상된 클론의 검증을 단순화합니다.

연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.